جداسازی و همسانه‏سازی ژن رمزگردان pgip (polygalacturonase inhibiting protein) از گیاه خربزه وحشی (cucumis melo var. agrestis) و انتقال آن به آرابیدوپسیس

یکی از مشکلات تولید محصولات جالیزی بخصوص گیاهان خانواده کدوئیان خسارت بالای پاتوژن‏های قارچی است که استفاده بی‏رویه از سموم را در پی داشته است. از طرفی بعضی از خویشاوندان وحشی خانواده کدوئیان مقاومت خوبی را در تقابل با انواع پاتوژن‏ها بروز داده‏اند و می‏توان از آنها به عنوان ذخایر ژنتیکی برای اصلاح گیاهان زراعی حساس بهره برد. در این پژوهش توالی‏های ژنی کد‏کننده ژن رمزگردان (pgip (polygalacturonase inhibiting protein از خربزه وحشی (cucumis melo var. agrestis) جداسازی شد. برای این کار از dna ژنومی و cdna سنتز شده از rna کل به عنوان الگو برای جداسازی توالی مورد نظر استفاده شد. پس از بررسی‏های بیوانفورماتیکی روی توالی‏های مشابه موجود در بانک ژن، پرایمرهای دقیق و دژنره از توالی‏های اجماعی طراحی شدند و توالی‏های مذکور پس از تکثیر با pcr در وکتورهای ta همسانه‏سازی و توالی‏یابی شدند. در مرحله بعد پرایمرهای حاوی سایت برشی xbai و saci طراحی شدند و قطعات ژنی پس از تکثیر مجدد در وکتورهای دوتاییpbi121 همسانه‏سازی و پس از بررسی‏های اولیه و اطمینان از صحت آنها، به اگروباکتریوم نژاد gv3101 منتقل شدند. گیاهان آرابیدوپسیس با اگروباکتریوم‏ها تلقیح و گیاهان تراریخت در محیط انتخابی گزینش شدند. سپس این گیاهان با روش‏های pcr و rt-pcr ارزیابی شدند. نتایج نشان داد با استفاده از هر دو نوع الگوی dna ژنومی و cdna، قطعه ژنی به طول 981 جفت باز که شامل orf کامل ژن pgip بود، ایجاد شد که نشان‏دهنده عدم وجود اینترون در ژن مذکور بود. آزمون pcr گیاهان انتخابی نشان داد که این گیاهان ژن pgip را دریافت کرده‏اند و آزمون rt-pcr بیانگر نسخه‏برداری این ژن در اکثر لاین‏های تراریخت بود. بررسی‏های اولیه نشان داد تغییرات مورفولوژیک یا فیزیولوژیک خاصی در گیاهان تراریخت ایجاد نشده است و نمو آنها مشابه گیاهان شاهد غیر تراریخت بوده است. خربزه وحشی، pgip، گیاه تراریخت، آرابیدوپسیس، جداسازی ژن